آزمایش ORAC یکی از دقیق ترین و معتبرترین روش ها برای اندازه گیری قدرت آنتی اکسیدانی ترکیبات طبیعی، مواد غذایی، عصاره ها و داروها است.
در این روش از رادیکال های پرواکسیل (ROO•) که از نظر بیولوژیک مشابه رادیکال های تشکیل شده در بدن هستند، استفاده می شود. این رادیکال ها به وسیلهٔ ترکیب AAPH تولید می شوند و باعث خاموش شدن فلورسانس مولکول فلورسئین می گردند.
زمانی که یک آنتی اکسیدان حضور دارد، از خاموش شدن فلورسانس جلوگیری می کند و طول زمان باقی ماندن سیگنال ملاک قدرت آن آنتی اکسیدانی است.
اصول آزمایش ORAC
استفاده از فلورسئین به عنوان پروب فلورسانس
تولید رادیکال های پرواکسیل توسط AAPH
اندازه گیری کاهش تدریجی فلورسانس در طول زمان
تعیین مساحت زیر منحنی (AUC)
مقایسه AUC نمونه با کنترل و استاندارد (معمولاً Trolox)
کاربردها
ارزیابی ظرفیت آنتی اکسیدانی مواد غذایی
بررسی ترکیبات ضد پیری و محافظت کننده سلولی
اندازه گیری قدرت آنتی اکسیدانی مکمل ها
تحلیل عصاره های گیاهی، دارویی و بیوشیمیایی
سنجش آنتی اکسیدان های محلول در آب و چربی
نکات تخصصی مهم
نتایج معمولاً به صورت μmol Trolox equivalents گزارش می شود.
نسبت به DPPH دقیق تر و زیست فیزیولوژیک تر است.
نیازمند پلیت ریدر فلورسانس و دقت زمانی بالا است.
دما (معمولاً 37°C) و پیوستگی اندازه گیری بسیار مهم است.
برای نتایج معتبر، نمونه ها باید در غلظت مناسب و تکرار کافی اندازه گیری شوند.